详细讲解胶体金免疫层析技术检测原理及方法应用

什么是胶体金免疫层析技术

胶体金免疫层析技术是以胶体金作为示踪标志物，应用于抗原抗体反应中的一种新型免疫标记技术。胶体金是由氯金酸水溶液在还原剂作用下，聚合成特定大小的金颗粒，颗粒之间因静电作用形成一种稳定的胶体状态，也称金溶胶。胶体金由于具有胶体稳定性。蛋白质强吸附性和高电子密度等特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而可用于定性或半定量的快速免疫检测方法中。

胶体金免疫层析技术的原理

胶体金免疫层析技术就是以胶体金为显色媒介，利用免疫学中抗原抗体能够特异性结合原理，在层析过程中完成这一反应，从而达到检测的目的。胶体金免疫层析技术的原理是样品中目标物与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和检测线（T线）上偶联抗原的免疫反应，从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中目标物进行定性检测。

将特异的抗体或抗原以条带状固定在硝酸纤维素（NC）膜上的某一区域，该区域有控制线和显示结果的测试线，当样品加入膜一端（如加样孔）时，借助毛细管作用向前移动，样品沿着膜运动到达该区域后，样品中相应的抗原或抗体与该抗原或抗体发生特异性结合而被截留，使该区域显示一定的颜色，通过可目测的胶体金标记物得到直观的显色结果，而流离标记物则越过这一区域，达到自动分离的目的。该方法用肉眼即可判读检测结果，可实现目标物的快速检测。胶体金免疫层析法就是利用胶体金本身的显色特点结合免疫层析技术用来诊断特异性的待测物。

胶体金免疫层析技术的方法

胶体金免疫层析当下的检测方法非常的多，有间接法、夹心法、双抗体夹心法、竞争法以及捕获法。

1、间接法是用胶体金来标记二抗，像是没有标记的特异性与已知抗原结合，间接法经常是用在检测血清样本中的病毒上；

2、双抗夹心法就是用在检测病原微生物性的大分子抗原，早早孕试纸就是用这个方法；

3、竞争法经常用在滥用药物、农药残留食品添加剂等检测上；

4、捕获法是用在风疹病毒、艾滋病等检测

非竞争性作用原理即双抗体夹心法：

检测试剂是一种与乳胶颗粒或胶体金属(一般采用胶体金)相偶联的待测抗原的特异性配体(即抗体Abl)，所谓特异性：就是某种抗体专一性的识别结合某种抗原决定簇。它被沉积在结合垫上。当样品(尿、血浆、全血等)加到样品垫后，由于毛细管作用，样品迅速浸透结合垫，检测试剂被溶解，并随着样品流沿膜条向前移动。若样品中存在待测抗原，它就会和检测试剂中的抗体结合形成Ag—Abl。随后，样品通过固化有捕获试剂(一般是待测抗原的另一表位特异性抗体Ab2)的测试线(testline)区域，将待测抗原一检测试剂复合物捕获形成Abl—Ag—Ab2复合物。样品继续前移，通过固化有抗Abl抗体(二抗Ab3)的质控线(control line)区域，形成Ab3一Abl—Ag—Ab2复合物。这种方式通常用于检测带有多个抗原位点的分析，如绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin，HCG)、人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)等。

竞争性作用的原理：

检测试剂仍是与乳胶颗粒或胶体金结合的抗体(Abl)，而捕获试剂则是待测抗原或待测抗原的模拟物。若样品中含有待测抗原，则样品和检测试剂形成复合物(Ag—Abl)，即样品中的待测抗原将检测试剂中的抗体完全饱和。随后在通过已固化有捕获试剂的区域时，不再发生反应，测试线处不显色；样品继续前移。复合物(Ag—Abl)被已固化在质控线处的抗Abl的抗体(二抗Ab2)所结合，形成Abl—Ag—Ab2复合物，使质控线显色。这种方式适用于检测带有单一抗原表位的小分子抗原，常用于违禁药物的检测等。

胶体金标记技术是继三大标记技术（荧光抗体技术、放射免疫分析和酶免疫技术，即经典的三大标记技术）之后，又一较为成熟且已得到广泛应用的免疫标记技术。 胶体金检测技术以其独特的应用优势，该技术因其操作简便、观察直观、灵敏度高、价格低廉等优点在医学、农产品农兽药残留生物学、生物芯片以及病原微生物检测等领域发挥着重要作用。其稳定性好、安全、简便，且不需任何仪器设备等优点，使其在多个领域得到广泛应用。